terça-feira, 27 de novembro de 2012

História do PCR



Kary Mullis concebeu a ideia para a reação em cadeia da polimerase, na primavera de 1983, enquanto um funcionário da Cetus Corporation, uma empresa de biotecnologia localizado perto de Berkeley, Califórnia. Mullis e seu assistente Fred Faloona tentou fazê-lo funcionar no final do ano, e logo foram acompanhados por outros cientistas Cetus que viram o grande potencial deste método. Neste grupo mais tarde eram pessoas no laboratório de Henry Erlich, que tinham vindo a trabalhar sobre métodos para identificar mutações no DNA do genoma humano como parte de um diagnóstico DNA  grupo de Cetus.Descrição da PCR foi sintetizado na sua primeira publicação, um artigo de 1985 em Ciência, na detecção da mutação que causa a anemia falciforme em todo o ADN genómico. Os detalhes do método de PCR e seus usos foram cobertos de forma mais completa em artigos publicados nos próximos dois anos. A narrativa geral da invenção da PCR, a política interna de Cetus Corporation, ea filosofia e antropologia da invenção científica podem ser encontradas no livro de Rabinow.
A polimerase de ADN originalmente utilizados para a PCR foi extraído a partir da bactéria E. coli . No entanto, depois de cada ciclo de síntese de DNA, a reação tem que ser aquecida para desnaturar o produto de ADN de cadeia dupla. Infelizmente, o aquecimento também irreversivelmente inativados esta polimerase, de forma nova enzima teve de ser adicionado no início de cada ciclo. A bactéria T. aquaticus vive em águas termais, e produz uma polimerase de ADN que não é inativada irreversibilidade a alta temperatura. David Gelfand e seus associados no Cetus, purificada, e em seguida clonado esta polimerase o que permite uma amplificação de PCR completa que ser feita com a abertura do tubo de reação. No entanto, a enzima termoestável foi encontrada para ser mais do que apenas uma conveniência. O passo de síntese de ADN pode agora ser feito a uma temperatura mais elevada do que era possível com a E. coli enzima, e descobriu-se que a cadeia de ADN molde foi agora copiado com alta fidelidade, eliminando os produtos não específicos que se prolongaram tentativas anteriores de amplificação.
Em 1993, Kary Mullis foi agraciado com o Prêmio Nobel pela descoberta da PCR.

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