Reação em cadeia da polimerase (PCR) tornou-se
rapidamente uma das técnicas mais amplamente utilizadas de biologia molecular e
por uma boa razão: é um meio rápido, barato e simples de produzir um número
relativamente grande de cópias de moléculas de DNA a partir de quantidades
diminutas de material de ADN fonte - mesmo quando a fonte de DNA é de qualidade
relativamente pobre.
PCR envolve a preparação da amostra, a mistura principal
e os iniciadores, seguida de detecção e análise dos produtos da reação. Estes
passos são discutidos abaixo.
A técnica da PCR pode ser muito útil para diagnósticos
médicos, mapeamento genético, tais procedimentos servem na detecção de doenças
hereditárias, clonagem de genes, em casos de teste de paternidade e bem como a
criação de organismos transgênicos.
Contribui significativamente na Medicina Forense em
coleta de pequenas amostras de DNA retiradas de cena de crimes (pedaços de
cabelo ou até mesmo minúsculas quantidades de DNA deixada em uma impressão
digital), essas amostras são amplificadas para serem analisadas pelo método de
fingerprinting (ação usada para a identificação do DNA humano, essa técnica
permite saber se o material genético do sangue é compatível com o individuo, ou
até mesmo no caso de confirmação de paternidade).
O principal proposito da PCR é fazer um número imenso de
cópias de um determinado fragmento gênico, ao qual o tamanho pode variar de
poucos pb (pares de base) até milhares de pb. A técnica explora função natural
da enzima de taq – polimerase, extraída da bactéria Thermus aquaticus, esta enzima é semelhante à enzima DNA –
polimerase que por sua vez é capaz de sintetizar DNA a partir de seus
precursores no sentido 5’ Þ 3’. Para catalizarem essa síntese, os
precursores de DNA devem estar presentes sob a forma de desoxirribonucleotídeos
trifosfatos (dATP, dTTP, dGTP, e dCTP).
Para utilizar essa técnica é necessário ter um conhecimento prévio
da sequencia dos genes a serem amplificados, e a partir disso são sintetizados
dosi primers ou iniciadores, ou seka, é a partir deles que se inicia a síntese
do DNA pela enzima taq. A síntese se desenvolve sempre no sentido 5’Þ 3’, abordaremos melhor esses conceitos
e procedimentos da técnica ao decorrer da pesquisa.
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